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條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型

健明迪檢測提供的條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型,討論與結(jié)論 1.病毒滴度的變化:接種病毒后,動物肺組織PVM?RT-PCR檢測可檢出病毒,病毒滴度在感染后3天達(dá)到高峰,并可維持至7日,隨后滴度下降,具有CMA,CNAS認(rèn)證資質(zhì)。
條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型
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討論與結(jié)論

1. 病毒滴度的變化:接種病毒后,動物肺組織PVM?RT-PCR檢測可檢出病毒,病毒滴度在感染后3天達(dá)到高峰,并可維持至7日,隨后滴度下降。

2. 感染動物體重較之未感染動物體重下降,動物多出現(xiàn)豎毛,弓背等癥狀。嚴(yán)重者體重下降,行動出現(xiàn)遲緩,耳及尾可見紫紺,震顫,處于瀕死狀態(tài)。用于藥效評價實(shí)驗(yàn)時,應(yīng)控制感染劑量,降低因感染出現(xiàn)的急性死亡(4日內(nèi))。6~7日的死亡率可作為藥效評價的指標(biāo)。

3. 病理損傷以充血、出血、肺組織水腫以及炎細(xì)胞浸潤為標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)測定肺間隔,以及肺通氣水平,進(jìn)而評估肺呼吸能力。

4. 炎癥因子重點(diǎn)關(guān)注IL-1β,IL-6,IL-18,MCP-1,IFN-γ等。

進(jìn)行人類RSV 肺炎感染研究,國內(nèi)外推薦使用PVM做替代實(shí)驗(yàn)。PVM的毒株不同,實(shí)驗(yàn)動物的品系不同,動物的臨床表型也會存在差異。本模型的表型與國外進(jìn)行的模型研究表型相似,在急性期的死亡率較低,有較長的臨床治療的窗口,可用于免疫治療的療效評價。

生物安全性

PVM為低于人間傳染病名錄三級安全風(fēng)險的病原,人類感染的風(fēng)險低,但不排除對免疫功能缺陷者的致病性。

PVM是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物必須排除的病原體,對動物有致病性。會干擾其他實(shí)驗(yàn)研究。

鑒于此,此感染實(shí)驗(yàn)必須在BSL-2級以上的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原學(xué)實(shí)驗(yàn),在ABSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)

評價驗(yàn)證

ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結(jié)構(gòu)蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點(diǎn)并協(xié)調(diào)病毒粒子形態(tài)形成方面發(fā)揮了核心作用,是寨卡病毒粒子組裝的重要功能分子。

制備方法

F0代構(gòu)建:

研究背景

寨卡病毒(ZIKV)屬于屬黃病毒科黃病毒屬,病毒顆粒呈球形,直徑40-70nm。孕婦感染可導(dǎo)致ZIKA綜合征,造成新生兒的小頭畸形;成人感染還可導(dǎo)致格林-巴利綜合征。寨卡病毒是單股正鏈RNA病毒,基因組長約10.8kb,含一條單一開放讀碼框。病毒蛋白由一個單一的多蛋白前體,經(jīng)宿主蛋白酶和病毒蛋白酶切而成,包括3個結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM/M、E)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。非結(jié)構(gòu)蛋白具有絲氨酸蛋白么、RNA解旋酶和RNA依賴RNA聚合酶功能。寨卡病毒主要通過病毒感染的伊蚊類蚊媒叮咬傳播;亦可通過母嬰傳播,包括宮內(nèi)感染和分娩時感染;也可通過輸血和性傳播。寨卡病毒感染的潛伏期數(shù)日至一周,約20%感染者出現(xiàn)臨床癥狀,典型病癥表現(xiàn)為:急性發(fā)熱伴斑丘疹、關(guān)節(jié)痛或結(jié)膜炎、肌痛和頭痛。臨床表現(xiàn)一般較輕,持續(xù)數(shù)天至一周,重癥病例少見,病死率極低。但是孕婦在妊娠期感染寨卡病毒可能會引起胎兒先天性小頭畸形或胎死宮內(nèi)。寨卡病毒粒子組裝的分子機(jī)制在很大程度上是未知的。有研究表明,ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結(jié)構(gòu)蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點(diǎn)并協(xié)調(diào)病毒粒子形態(tài)形成方面發(fā)揮了核心作用。一種破壞這些相互作用的突變不會顯著影響病毒RNA復(fù)制,但會選擇性地破壞病毒粒子的組裝,表明了這些相互作用在病毒形態(tài)發(fā)生中的特定作用。研究還發(fā)現(xiàn),ZIKV RNA的3'UTR可能作為一種“招募信號”,通過與NS2A結(jié)合進(jìn)入病毒粒子的組裝位點(diǎn)。在病毒粒子組裝位點(diǎn)C-prM-E協(xié)調(diào)切割后,NS2A可能將病毒RNA呈遞給C蛋白形成核衣殼,然后被prM/E蛋白包膜。

模型信息

中文名稱:條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型

英文名稱:ZIKV-NS2A conditional expressing mouse model

類型:Zika病毒模型

分級:NA

用途:用于Zika病毒相關(guān)研究。

研制單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所

保存單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所

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