造模后各大鼠體重降低，攝食量減少,排便量增多、出現(xiàn)稀便和無(wú)定形軟便，自主運(yùn)動(dòng)量減少，結(jié)腸推進(jìn)率加快。其病理生理特征與臨床研究結(jié)果基本吻合。建模之前，正常組與模型組之間的結(jié)腸運(yùn)動(dòng)指數(shù)、2h排出的糞粒數(shù)以及玻璃小球排出時(shí)時(shí)間均無(wú)差異；給藥前，與正常組比較，模型組結(jié)腸MI明顯增加，差異非常顯著（P<0.05），模型組大鼠排出的糞粒數(shù)明顯增加，差異顯著（P<0.05），模型組大鼠玻璃小球排出時(shí)間縮短，差異非常顯著（P<0.05）；中藥方劑治療7 d后能夠明顯改善動(dòng)物的PI-IBS癥狀。大鼠體重、攝食量增加，排便量減少、稀便減少，自主運(yùn)動(dòng)量接近正常。給藥后，中藥方劑中高劑量組較模型組MI顯著降低（P<0.05）；中藥方劑低中高劑量組大鼠糞粒數(shù)較模型組顯著降低（P<0.05）；中藥方劑各給藥組較模型組大鼠玻璃小球排出時(shí)間明顯增加，差異非常顯著（P<0.05）。

炎癥后腸易激綜合征（PI-IBS）是一種慢性腸道功能性疾病，一般繼發(fā)于急性胃腸道感染后。本課題研究采用了乙酸灌腸聯(lián)合束縛應(yīng)激法建立的PI-IBS大鼠模型，在建模過(guò)程中，模型大鼠在灌注乙酸的前三天均出現(xiàn)腹瀉的癥狀，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各組大鼠腹瀉癥狀均有不同程度的緩解。該方法可顯著增強(qiáng)大鼠的結(jié)腸運(yùn)動(dòng)，導(dǎo)致排便及大便性狀異常，同時(shí)結(jié)腸黏膜完整，無(wú)器質(zhì)性損害，在病理結(jié)構(gòu)上無(wú)明顯改變。本動(dòng)物模型模擬了臨床上PI-IBS患者的大部分典型癥狀，因此本研究所采用的乙酸灌腸聯(lián)合束縛應(yīng)激法建立的PI-IBS大鼠模型可以作為研究IBS的動(dòng)物模型。

參考文獻(xiàn):

[1]La JH, Kim TW, Sung TS, Kang JW, Kim HJ, Yang IS. Visceral hypersensitivity and altered colonic motility after subsidence of inflammation in a rat model of colitis. World J Gastroenterol. 2003 Dec;9(12):2791-5.

[2]Williams CL, Villar RG, Peterson JM, Burks TF. Stress-induced changes in intestinal transit in the rat: a model for irritable bowel syndrome. Gastroenterology. 1988 Mar;94(3):611-21.

[3]Iwa M, Matsushima M, Nakade Y, Pappas TN, Fujimiya M, Takahashi T. Electroacupuncture at ST-36 accelerates colonic motility and transit in freely moving conscious rats. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006 Feb;290(2):G285-92.

本實(shí)驗(yàn)采用健康SPF級(jí)SD大鼠，經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，符合動(dòng)物倫理學(xué)3R原則。動(dòng)物飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所SCXK(京)2011-0012，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)法律規(guī)定。

1動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方法

1.1大鼠體重變化

記錄各組大鼠在造模前，乙酸加束縛應(yīng)激造模后，給藥后體重的變化。

1.2大鼠結(jié)腸運(yùn)動(dòng)

實(shí)驗(yàn)前禁食24h。將橡膠小囊與直徑為2 mm的塑料導(dǎo)管連接，并用0號(hào)手術(shù)線(xiàn)扎緊，將塑料導(dǎo)管與三通管（一端接壓力換能器，另一端接1 mL的注射器）相連接，用注射器注入水，排凈氣泡，使整個(gè)管路密封，再將壓力換能器與Biopac MP150多導(dǎo)生理記錄儀相連，用Biopac MP150記錄儀記錄結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的曲線(xiàn)。先將小囊中的水吸入注射器，用甘油潤(rùn)滑橡膠小囊、導(dǎo)管及大鼠肛門(mén)，輕輕將小囊聯(lián)通導(dǎo)管從肛門(mén)插入大腸腸道7 cm，再用膠布將導(dǎo)管固定于鼠尾，防止滑脫。往小囊內(nèi)緩慢注入水，觀察記錄儀描記情況，選擇描記曲線(xiàn)最敏感時(shí)停止注射。穩(wěn)定30 min后，描記30min。然后用Biopac MP150多導(dǎo)生理記錄儀自帶分析軟件，以5 min為一個(gè)時(shí)間段，計(jì)算連續(xù)30 min的曲線(xiàn)下面積，取平均值，作為大鼠的結(jié)腸運(yùn)動(dòng)指數(shù)（Motility Index，MI）[3]。

1.3 大鼠2h內(nèi)排便的糞粒數(shù)

籠內(nèi)墊清潔濾紙，計(jì)算2 h內(nèi)大鼠排便的糞粒數(shù)。

1.4大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時(shí)間

取玻璃小球（直徑3 mm）沿大鼠肛門(mén)放入（用橡膠管輔助）距肛門(mén)3 cm的直腸內(nèi)，后迅速移至墊清潔濾紙的籠內(nèi)喂食飲水，計(jì)時(shí)。計(jì)算直腸內(nèi)玻璃小球排出時(shí)間。

1.5數(shù)據(jù)分析

采用SPASS軟件13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來(lái)表示，各組間均數(shù)比較采用t檢測(cè)，P<0.05為有差異，P<0.01為差異有顯著性。

2評(píng)價(jià)指標(biāo)體系

造模后各大鼠體重降低，攝食量減少,排便量增多、出現(xiàn)稀便和無(wú)定形軟便，自主運(yùn)動(dòng)量減少，結(jié)腸推進(jìn)率加快。其病理生理特征與臨床研究結(jié)果基本吻合。藥物治療7 d后，大鼠體重、攝食量增加，排便量減少、稀便減少，自主運(yùn)動(dòng)量接近正常。

2.1大鼠體重變化

模型組大鼠與正常組大鼠比較，造模后各大鼠體重降低且有顯著性差異。

2.2大鼠結(jié)腸運(yùn)動(dòng)

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組結(jié)腸MI增加且有顯著性差異。

2.3 大鼠2h內(nèi)排便的糞粒數(shù)

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組大鼠排出的糞粒數(shù)增加且有顯著性差異。

2.4大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時(shí)間

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組大鼠玻璃小球排出時(shí)間縮短且有顯著性差異。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1大鼠體重的變化

各組大鼠體重在乙酸加束縛應(yīng)激的造模過(guò)程中均有一定程度的增長(zhǎng)，正常組較模型組增長(zhǎng)快。造模后，與正常組比較，各大鼠體重明顯降低（P<0.01），給藥后，各給藥組較模型組無(wú)顯著差異，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1大鼠體重變化(±s，n=10)

Figure1 The change of rats body weight(±s，n=10)

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.2大鼠結(jié)腸運(yùn)動(dòng)變化

建模前，正常組與模型組之間的MI無(wú)差異，造模后給藥前，模型組結(jié)腸MI較正常組明顯增加，差異非常顯著（P<0.05），給藥后，中藥方劑中高劑量組較模型組顯著降低（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2大鼠MI值

Figure2The distal colonic MI of rats

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.3 大鼠2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)

建模前，正常組與模型組大鼠之間2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)無(wú)差異，建模后給藥前，模型組大鼠排出的糞粒數(shù)較正常組明顯增加，差異顯著（P<0.05），藥物治療后，匹維溴銨組及中藥方劑低中高劑量組大鼠糞粒數(shù)較模型組顯著降低（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3大鼠2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)

Figure3The number of fecal pellet output in 2 hours

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.4 大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時(shí)間

建模前，正常組與模型組大鼠之間的玻璃小球排出時(shí)間無(wú)差異，造模后給藥前，模型組大鼠玻璃小球排出時(shí)間較正常組明顯縮短，差異非常顯著（P<0.05），藥物治療后，匹維溴銨組及中藥方劑各給藥組較模型組大鼠玻璃小球排出時(shí)間增加，差異非常顯著（P<0.05），見(jiàn)圖2-4。

圖2-4 大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時(shí)間(s)

Figure2-4The time of the glass bead putput(s)

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠60只，雄性，（250±20）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：【SCXK(京)2011-0012】。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

2實(shí)驗(yàn)材料

乙酸（冰醋酸），分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20130123；PBS;甘油。

注射器；硅膠管；膠帶；橡膠小球；導(dǎo)管；壓力換能器；MP150多導(dǎo)生理記錄儀、玻璃小球。

3分組及實(shí)驗(yàn)

隨機(jī)將大鼠分為6組（n=10），分別為正常組、模型組（乙酸加束縛應(yīng)激）、陽(yáng)性對(duì)照組、中藥方劑低、中、高劑量組。除正常組動(dòng)物外，均采用單籠飼養(yǎng)，自由飲食，12h/12h黑暗與光照交替，室溫24℃。

乙酸加束縛IBS組：各建模組大鼠均采用Jun-Ho La的方法來(lái)建立大鼠PI-IBS模型。實(shí)驗(yàn)前的24h所有動(dòng)物禁食，不禁水，經(jīng)大鼠肛門(mén)插入連接注射器的硅膠管（深度為距離肛門(mén)約8cm），往結(jié)腸內(nèi)灌入1mL（40mL·L-1）的乙酸，緩慢拔出硅膠管，迅速用手壓迫肛門(mén)同時(shí)將大鼠尾巴抬高30s，然后用1mL 0.01mol·L-1的PBS溶液沖洗結(jié)腸，恢復(fù)7天。乙酸刺激后的第8天用膠帶束縛大鼠的上半身（包括前肩、前上肢、胸部），限制大鼠前上肢抓撓頭面部，但不限制其活動(dòng)，束縛時(shí)間為1h[1-2]。分別于建模前、給藥前及給藥后測(cè)量各指標(biāo)[1-2]。

1. 目的及意義

腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome，IBS）是一種常見(jiàn)的功能性腸道疾病，以腹痛或腹部不適伴排便習(xí)慣改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，其發(fā)病原因迄今尚不明確，被認(rèn)為是胃腸動(dòng)力異常、內(nèi)臟感覺(jué)異常、腦腸調(diào)控異常、炎癥和精神心理等多種因素共同作用的結(jié)果。通過(guò)乙酸灌腸的方法，構(gòu)建急性腸易激綜合征大鼠模型。為尋找防治炎癥后腸易激綜合征的有效藥物及臨床診斷和治療靶點(diǎn)提供參考。

2. 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展

目前，炎癥后腸易激綜合征主要通過(guò)三硝基苯磺酸、葡聚糖硫酸鈉、脫氧膽酸、乙酸等化學(xué)試劑誘導(dǎo)[1]。乙酸灌腸加束縛應(yīng)激可制備急性炎癥后腸易激綜合癥[2]。該模型一方面排除了化學(xué)刺激因素導(dǎo)致的內(nèi)臟敏感性增高[3]，另一方面束縛應(yīng)激可以引起大鼠排便的明顯增多, 表現(xiàn)出IBS的基本特征[4]，具有成本低、重復(fù)性好、模型穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。較好的模擬IBS的多因素發(fā)病機(jī)制，反映炎癥和應(yīng)激在IBS中的作用。Cong Dai[5]等向結(jié)腸內(nèi)滴注4%醋酸和束縛應(yīng)激發(fā)現(xiàn)緊密連接蛋白( ZO - 1和occludin)的表達(dá)降低，導(dǎo)致結(jié)腸細(xì)胞通透性增加。研究發(fā)現(xiàn)[6]乙酸誘導(dǎo)的PI-IBS 模型結(jié)腸運(yùn)動(dòng)加快，腸道 5-HT 分泌增加，近端結(jié)腸肥大細(xì)胞數(shù)目明顯增加等特征。課題組研究發(fā)現(xiàn)[7]，PI-IBS大鼠的結(jié)腸組織和腦組織內(nèi)多種腦腸肽的水平均有顯著的變化, 提示這些腦腸肽在腦-腸中可能參與IBS的病理生理過(guò)程。

參考文獻(xiàn)：

[1]臧凱宏,秦紅巖.感染后腸易激綜合征動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,35(04):598-601.

[2]La JH, Kim TW, Sung TS, Kang JW, Kim HJ, Yang IS. Visceral hypersensitivity and altered colonic motility after subsidence of inflammation in a rat model of colitis. World J Gastroenterol. 2003 Dec;9(12):2791-5.

[3]呂紅,王偉岸,錢(qián)家鳴.傳統(tǒng)束縛應(yīng)激動(dòng)物模型內(nèi)臟感覺(jué)的新評(píng)價(jià)[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2005(02):111-113.

[4]安鈺,白殿卿,付健,孫曉寧.乙酸灌腸加束縛應(yīng)激致大鼠腸易激綜合征模型的建立及其評(píng)價(jià)[J].世界華人消化雜志,2009,17(15):1548-1551.

[5]Dai C, Guandalini S, Zhao DH, Jiang M. Antinociceptive effect of VSL#3 on visceral hypersensitivity in a rat model of irritable bowel syndrome: a possible action through nitric oxide pathway and enhance barrier function. Mol Cell Biochem. 2012 Mar;362(1-2):43-53.

[6]王迎寒,周淑媛,王婭杰,鞏仔鵬,楊慶,闞曉溪,阮從瀟,張瑞杰,朱曉新.戊己丸不同配伍方對(duì)炎癥后腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及5-羥色胺含量的影響[J].世界華人消化雜志,2013,21(13):1226-1233.

[7]黃鶴飛,強(qiáng)偉杰,楊慶,李玉潔,翁小剛,王婭杰,李琦,蔡維艷,陳濤,朱曉新,陳穎.戊己丸對(duì)炎癥后腸易激綜合征大鼠腦腸肽的調(diào)控作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2018,26(03):265-271.